無菌PCR潔凈實驗室裝修設(shè)計方案,昆山清陽凈化工程是為實驗室工作人員搭建一個安全、環(huán)保、美觀、舒適、智能的實驗室,基因擴增實驗又稱PCR ,其特點是能將微量的DNA 大幅增加,PCR 是分子生物研究和實驗的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于微生物各個領(lǐng)域,例如:檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷,DNA 指紋、個體識別、親子鑒定以及法醫(yī)物證,動、植物檢疫,動物及其衍生產(chǎn)品的檢測,動物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測,轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等。
一、 PCR凈化實驗室平面布局
基因擴增實驗室又稱PCR 實驗室,實驗室原則上分為4個單獨的工作區(qū)域,前兩去為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū)。擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),即從試劑準備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動。實驗室的氣流也應(yīng)從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間, 工作間與緩沖間之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的工作室,并有明顯的標志,各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間如果是緊密相連,需安裝物品傳遞窗。每個工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm 安裝數(shù)量為每20㎡安裝一直40W 的紫外燈。 實驗室較為理想的布局模式為有一個專用走廊,試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)很規(guī)范地排列在一起,前三個區(qū)各有一個緩沖間,可供換工作服和工作鞋使用,頂上可安裝一紫外燈。內(nèi)實驗區(qū)域設(shè)為正壓或常壓狀態(tài),緩沖間內(nèi)設(shè)為負壓狀態(tài)(可上設(shè)一抽風裝置),使這三個區(qū)的空氣流向為有實驗區(qū)域內(nèi)向外,緩沖間內(nèi)通向內(nèi)實驗室和走廊的門可安裝一種連鎖裝置,當一個門打開時,另一門必須處于關(guān)閉狀態(tài),防止出現(xiàn)兩個門同時打開的情況。產(chǎn)物分析區(qū)可不設(shè)緩沖間,但應(yīng)設(shè)為負壓狀態(tài)(裝一個排風扇即可),使空氣流向由外向內(nèi),以防止擴增產(chǎn)物對空氣流出。每一區(qū)域都須有明確的標記,工作按試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)至產(chǎn)物分析區(qū)單一流向進行,各區(qū)的儀器設(shè)備包括工作服、鞋、實驗記錄本和筆都必須專用。如果無法做到以上模式,以下基本要求必須做到:
(1) 四個區(qū)域必須是相互獨立的。
(2) 各區(qū)域的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的。
(3) 各區(qū)完全獨立,緩沖間可有可無。如為一個區(qū)套一個區(qū)的模式,區(qū)間不能直通,應(yīng)有緩沖間,供換工作服及鞋子用,并保證兩個區(qū)域間始終處于完全分隔狀態(tài)。
(4) 產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風扇及其他抽風裝置,持續(xù)負壓。
二、 各區(qū)功能及主要設(shè)備
(1) 試劑準備區(qū):擴增試劑的配置、分裝和保存。未設(shè)緩沖間的試劑儲存和準備區(qū),工作區(qū)域為正壓。用于擴增的試劑應(yīng)冰凍儲存。主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器、紫外燈。
(2) 樣品制備區(qū): 實驗室樣品的混樣和測試樣品的制備。未設(shè)緩沖間時工作區(qū)域為負壓或減壓,可安裝排風系統(tǒng)。所有的器具在使用前應(yīng)經(jīng)過徹底清洗并消毒,防止交叉污染。主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜(或潔凈工作臺、排風柜)、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水裝置、廢棄物容器、紫外燈。根據(jù)制備樣品的性質(zhì)和要求決定操作臺是選用生物安全柜、潔凈工作臺還是排毒柜,如疾病控制中心、臨床醫(yī)學(xué)實驗室一般選用生物安全柜,植物轉(zhuǎn)基因、檢疫等可選用排毒柜樣品制備需要較高潔凈條件的選用潔凈工作臺。
(3) 擴增區(qū):PCR 擴增反應(yīng)體系的配置和模板的加入,核酸擴增。未設(shè)緩沖間的擴增區(qū),工作間區(qū)域為負壓或減壓,可安裝排風系統(tǒng)。加樣應(yīng)在超凈工作臺(生物安全柜)內(nèi)進行,超凈工作臺的氣流方向一選擇垂流式。核酸擴增設(shè)備、冰箱、潔凈工作臺、離心機、加樣器、廢棄物容器、紫外燈。
(4) 擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增產(chǎn)物的測定。未設(shè)緩沖間的擴增產(chǎn)物區(qū),工作區(qū)域為負壓或減壓,用安裝排風系統(tǒng)。若實驗僅采用全自動擴增檢測儀 (如實時熒光定量PCR 儀),可將擴增區(qū)與擴增產(chǎn)物分析區(qū)合并為一個區(qū)。本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴鍋等。
三、 實驗室空條通風系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制
各個區(qū)域之間應(yīng)具備單相的實驗工藝流、物流、人流和氣流,形成單相流程,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。 PCR 實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證個實驗區(qū)的壓力要求。
四、 實驗室裝修
實驗室的墻體,包括頂棚,應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好;所有陰角宜采用圓弧形線條過渡;墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒、;地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。地面建議采用PVC 卷材地面或自流坪地面,整體性好,便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(≥800mm )接縫需要小于2mm 。燈具要選取凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。 在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。在試劑準備區(qū)和樣品制備區(qū)還設(shè)置移動紫外燈,對實驗桌進行局部消毒。 試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染。 試劑和樣品通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和樣品在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
五、 注意問題
(1) 幾個區(qū)域的大小設(shè)置情況,應(yīng)該是試劑準備區(qū)、產(chǎn)物擴增區(qū)、擴增分析區(qū)、要小一些。樣品制備區(qū)應(yīng)大一些。因為樣品制備室要防止一個生物安全柜和一個低溫冰箱。
(2) 試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)設(shè)立緊急洗眼器,以備不時之需。
(3) PCR 實驗室的結(jié)晶度可以根據(jù)用戶的實際使用情況和資金投入來設(shè)計。
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